Gēla elektroforēze ir viena no galvenajām metodēm, ko izmanto molekulārajā bioloģijā DNS analīzei.Šī metode ietver DNS fragmentu migrāciju caur želeju, kur tos atdala atkarībā no izmēra vai formas.Tomēr vai elektroforēzes eksperimentu laikā esat saskāries ar kādām kļūdām, piemēram, uz agarozes želejas ir izsmērētas joslas vai uz želejas nav joslu?Kāds varētu būt šo kļūdu cēlonis?
Mūsu tehniķi šeit ir apkopojuši dažus problēmu novēršanas pasākumus jūsu uzziņai.
1. Uz agarozes želejas uzsmērētas joslas
●DNS tika degradēta.Izvairieties no nukleāzes piesārņojuma.
● Elektroforēzes buferis nav svaigs.Pēc atkārtotas elektroforēzes bufera lietošanas jonu stiprums samazinās, un tā pH vērtība palielinās, līdz ar to bufera kapacitāte pavājinās, kas ietekmē elektroforēzes efektu.Ieteicams bieži nomainīt elektroforēzes buferi.
● Tika izmantoti nepareizi elektroforēzes apstākļi.Neļaujiet spriegumam pārsniegt 20 V/cm un elektroforēzes laikā uzturiet temperatūru <30°C.Lai veiktu milzīgās DNS virknes elektroforēzi, temperatūrai jābūt <15°C. Pārbaudiet, vai elektroforēzes buferim ir pietiekama bufera jauda.
● Gēlā tika ievietots pārāk daudz DNS.Samaziniet DNS daudzumu.
● Pārāk daudz sāls DNS.Izmantojiet etanola nogulsnēšanu, lai noņemtu liekos sāļus uzlabotajā.
● DNS bija piesārņota ar olbaltumvielām.Izmantojiet fenola ekstrakcijas, lai noņemtu proteīnu progresīvā stāvoklī.
● DNS tika denaturēta.Pirms elektroforēzes nesildiet.Atšķaida DNS buferšķīdumā ar 20 mM NaCl.
2. Anomālijas DNS joslu migrācija
● λHind III fragmenta COS vietas renaturācija.Pirms elektroforēzes karsējiet DNS 5 minūtes zem 65°C un pēc tam 5 minūtes atdzesējiet uz ledus vienības.
● Tika izmantoti nepareizi elektroforēzes apstākļi.Neļaujiet spriegumam pārsniegt 20 V/cm un elektroforēzes laikā uzturiet temperatūru <30°C.Pārbaudiet, vai elektroforēzes buferim ir pietiekama bufera jauda.
● DNS tika denaturēta.Pirms elektroforēzes nesildiet.Atšķaida DNS buferšķīdumā ar 20 mM NaCl.
3. Vājas vai nav DNS joslas uz agarozes gela
● Gēlā nebija pietiekami daudz vai koncentrācijas DNS.Palieliniet DNS daudzumu.Poliakrilamīda gēla elektroforēze ir nedaudz jutīgāka nekā agarozes elektroforēze, un parauga slodzi var atbilstoši samazināt.
● DNS tika degradēta.Izvairieties no nukleāzes piesārņojuma.
● DNS tika elektroforēts no gēla.Elektroforējiet želeju mazāk laika, izmantojiet zemāku spriegumu vai izmantojiet lielāku gēla procentuālo daudzumu.
● Ar etīdija bromīdu iekrāsotas DNS vizualizācijai tika izmantots nepareizs W gaismas avots.Lai palielinātu jutību, izmantojiet īsviļņu (254 nm) W gaismu.
4. Trūkst DNS joslu
●Mazā izmēra DNS tika elektroforēts no gēla.Elektroforējiet želeju mazāk laika, izmantojiet zemāku spriegumu vai izmantojiet lielāku gēla procentuālo daudzumu.
● Grūti atšķirt līdzīgas molekulas DNS joslas.Palieliniet elektroforēzes laiku un pārbaudiet koncentrācijugēla, lai pārliecinātos, ka želeja tiek izmantota pareizi.
● DNS tika denaturēta.Pirms elektroforēzes nesildiet.Atšķaida DNS buferšķīdumā ar 20 mM NaCl.
● DNS pavedieni ir milzīgi, un parastā gēla elektroforēze nav piemērota.Analizējiet impulsa gēla elektroforēzi.Kādas citas problēmas jums ir bijušas ar agarozes gēla elektroforēzi?Nākotnē mēs pētīsim vairāk ceļvežu.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) ir specializēts uzņēmums, kas Ķīnā koncentrējas uz ar elektroforēzi saistītiem produktiem.Tās stāsts sākas 1970. gadā, kad Ķīna vēl nebija sākusi reformu un atvēršanas laiku.Gadu gaitā uzņēmumam Liuyi Bitotech ir savs zīmols, kas vietējā elektroforēzes produktu tirgū ir pazīstams kā Liuyi zīmols.
Liuyi zīmolam Ķīnā ir vairāk nekā 50 gadu vēsture, un uzņēmums var nodrošināt stabilus un augstas kvalitātes produktus visā pasaulē.Gadu gaitā attīstoties, tas ir jūsu izvēles vērts!
Liuyi Biotech horizontālās elektroforēzes šūnas (tvertnes/kameras) ir augstas kvalitātes ar labu izskatu.Ar dažāda izmēra gēla paplātēm tie var atbilst jūsu dažādām eksperimentālajām prasībām.Mums ir sava tehniskā komanda un rūpnīca.No projektēšanas līdz ražošanai, izejmateriāliem līdz galvenajām daļām, mēs varam kontrolēt visu procesu.DYCP 31 sērija ir paredzēta DNS elektroforēzei, kas ir modelisDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, unDYCP-31E.Atšķirības starp tām ir gēla izmēri un cena.Mēs saviem klientiem piedāvājam pilna izmēra produktus.ModelisDYCP-32Cvar izgatavot lielāko želeju 250 mm * 250 mm.
Tikmēr mēs iesakām mūsu elektroforēzes barošanas avotuDYY-6C,DYY-6DunDYY-10Cmūsu elektroforēzes šūnām (tvertnēm/kamerām) DYCP-31 un 32 sērijām.
Ja vēlaties iegūt vairāk informācijas par produktiem, lūdzu, apmeklējiet šo vietni, lai iegūtu vairāk informācijas, un laipni lūdzam sazināties ar mums pa e-pastu, lai informētu mūs par savām vēlmēm un noskaidrotu, vai mēs varam jums piedāvāt risinājumus.
Lai iegūtu vairāk informācijas par mums, lūdzu, sazinieties ar mums pa e-pastu[aizsargāts ar e-pastu], [aizsargāts ar e-pastu].
Ievietošanas laiks: 2022. gada 9. maijs