Kas ir poliakrilamīda gēla elektroforēze?

Poliakrilamīda gēla elektroforēze

Gēla elektroforēze ir fundamentāla metode laboratorijās visās bioloģiskajās disciplīnās, kas ļauj atdalīt makromolekulas, piemēram, DNS, RNS un proteīnus. Dažādi atdalīšanas līdzekļi un mehānismi ļauj efektīvāk atdalīt šo molekulu apakškopas, izmantojot to fiziskās īpašības. Jo īpaši olbaltumvielām bieži tiek izvēlēta poliakrilamīda gēla elektroforēze (PAGE).

PAGE ir metode, kas atdala makromolekulas, piemēram, olbaltumvielas, pamatojoties uz to elektroforētisko mobilitāti, tas ir, analītu spēju virzīties uz pretēja lādiņa elektrodu. PAGE to nosaka molekulas lādiņš, izmērs (molekulmasa) un forma. Analīti pārvietojas pa porām, kas veidojas poliakrilamīda gēlā. Atšķirībā no DNS un RNS, proteīnu uzlāde atšķiras atkarībā no iekļautajām aminoskābēm, kas var ietekmēt to darbību. Aminoskābju virknes var arī veidot sekundāras struktūras, kas ietekmē to šķietamo izmēru un līdz ar to to, kā tās spēj pārvietoties pa porām. Tāpēc dažkārt var būt vēlams proteīnus pirms elektroforēzes denaturēt, lai tos linearizētu, ja nepieciešams precīzāks lieluma novērtējums.

SDS LAPA

Nātrija-dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze ir metode, ko izmanto proteīnu molekulu atdalīšanai ar masu no 5 līdz 250 kDa. Olbaltumvielas tiek atdalītas, pamatojoties tikai uz to molekulmasu. Nātrija dodecilsulfāts, anjonu virsmaktīvā viela, tiek pievienots, gatavojot želejas, kas maskē olbaltumvielu paraugu iekšējos lādiņus un nodrošina tiem līdzīgu lādiņa un masas attiecību. Vienkāršiem vārdiem sakot, tas denaturē olbaltumvielas un piešķir tiem negatīvu lādiņu.

Vietējā LAPA

Native PAGE ir metode, kurā proteīnu atdalīšanai izmanto nedenaturētus gēlus. Atšķirībā no SDS PAGE, želeju pagatavošanā netiek pievienots denaturējošs līdzeklis. Rezultātā proteīnu atdalīšana notiek, pamatojoties uz olbaltumvielu lādiņu un izmēru. Šajā tehnikā proteīnu uzbūve, locīšana un aminoskābju ķēdes ir faktori, no kuriem ir atkarīga atdalīšana. Proteīni šajā procesā netiek bojāti, un tos var atgūt pēc atdalīšanas pabeigšanas.

Kā darbojas poliakrilamīda gēla elektroforēze (PAGE)?

PAGE pamatprincips ir analītu atdalīšana, izlaižot tās caur poliakrilamīda gēla porām, izmantojot elektrisko strāvu. Lai to panāktu, akrilamīda-bisakrilamīda maisījumu polimerizē (poliakrilamīdu), pievienojot amonija persulfātu (APS). Reakcija, ko katalizē tetrametiletilēndiamīns (TEMED), veido tīklu līdzīgu struktūru ar porām, caur kurām var pārvietoties analīti (2. attēls). Jo lielāks ir gēlā iekļautā akrilamīda procentuālais daudzums, jo mazāks ir poru izmērs, līdz ar to mazāki proteīni, kas varēs iziet cauri. Akrilamīda un bizakrilamīda attiecība arī ietekmēs poru izmēru, taču tā bieži tiek saglabāta nemainīga. Mazāki poru izmēri samazina arī ātrumu, ar kādu mazie proteīni spēj pārvietoties pa gēlu, uzlabojot to izšķirtspēju un neļaujot tiem ātri noplūst buferī, kad tiek pielietota strāva.

Iekārtas poliakrilamīda gēla elektroforēzei

Gēla elektroforēzes šūna (tvertne/kamera)
Gēla tvertne poliakrilamīda gēla elektroforēzei (PAGE) atšķiras no agarozes gēla tvertnes. Agarozes gēla tvertne ir horizontāla, bet PAGE tvertne ir vertikāla. Ar vertikālu elektroforēzes šūnu (tvertni/kameru) starp divām stikla plāksnēm ielej plānu želeju (parasti 1,0 mm vai 1,5 mm) un uzstāda tā, lai gēla apakšdaļa būtu iegremdēta buferšķīdumā vienā kamerā, bet augšpuse būtu iegremdēta buferšķīdumā. citā kamerā. Kad tiek pielietota strāva, neliels bufera daudzums migrē caur želeju no augšējās kameras uz apakšējo kameru. Ar spēcīgām skavām, kas garantē, ka montāža paliek vertikālā stāvoklī, iekārta atvieglo ātru gēla darbību ar vienmērīgu dzesēšanu, kā rezultātā veidojas atšķirīgas joslas.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) ražo dažādu izmēru poliakrilamīda gēla elektroforēzes šūnas (tvertnes/kameras). Modeļi DYCZ-20C un DYCZ-20G ir vertikālas elektroforēzes šūnas (tvertnes/kameras) DNS sekvencēšanas analīzei. Dažas vertikālās elektroforēzes šūnas (tvertnes/kameras) ir savietojamas ar blotēšanas sistēmu, piemēram, modelis DYCZ-24DN, DYCZ-25D un DYCZ-25E ir saderīgas ar Western blotēšanas sistēmas modeli DYCZ-40D, DYCZ-40G un DYCZ-40F, ko izmanto proteīna molekulas pārnešanai no gēla uz membrānu. Pēc SDS-PAGE elektroforēzes Western blotēšana ir metode specifiska proteīna noteikšanai olbaltumvielu maisījumā. Šīs blotēšanas sistēmas varat izvēlēties atbilstoši eksperimentālajām prasībām.

Elektroforēzes barošanas avots
Lai nodrošinātu elektrību želejas darbināšanai, jums būs nepieciešams elektroforēzes barošanas avots. Uzņēmums Liuyi Biotechnology piedāvā virkni elektroforēzes barošanas avotu visiem lietojumiem. Modelis DYY-12 un DYY-12C ar augstu stabilu spriegumu un strāvu var izpildīt augstsprieguma elektroforēzes prasības. Tam ir statīva, laika noteikšanas, VH un soli pa solim pielietojuma funkcija. Tie ir ideāli piemēroti IEF un DNS sekvencēšanas elektroforēzes lietošanai. Vispārīgai olbaltumvielu un DNS elektroforēzes pielietošanai mums ir modelis DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 un tā tālāk, kas ir arī karstās pārdošanas barošanas avoti ar elektroforēzes šūnām (tvertnēm/kambarām). Tos var izmantot vidēja un zemsprieguma elektroforēzes lietojumiem, piemēram, izmantošanai skolas laboratorijā, slimnīcas laboratorijā un tā tālāk. Vairāk modeļu barošanas avotiem, lūdzu, apmeklējiet mūsu vietni.

Liuyi zīmolam Ķīnā ir vairāk nekā 50 gadu vēsture, un uzņēmums var nodrošināt stabilus un augstas kvalitātes produktus visā pasaulē. Gadu gaitā attīstoties, tas ir jūsu izvēles vērts!

Lai iegūtu vairāk informācijas par mums, lūdzu, sazinieties ar mums pa e-pastu[aizsargāts ar e-pastu] or [aizsargāts ar e-pastu].

Atsauces Kas ir poliakrilamīda gēla elektroforēze?
1. Karen Steward PhD Poliakrilamīda gēla elektroforēze, kā tā darbojas, tehnikas varianti un tās pielietojumi