Mēs pagājušajā nedēļā dalījāmies ar vairākiem apsvērumiem par celulozes acetāta membrānas elektroforēzes izmantošanu, un mēs šodien pabeigsim šo tēmu jūsu uzziņai.
Izvēle no Bufera koncentrācija
Bufera koncentrācija, ko izmanto celulozes acetāta membrānas elektroforēzē, parasti ir zemāka nekā papīra elektroforēzē izmantotā. Parasti izmantotais pH 8,6BArbitālo buferi parasti izvēlas diapazonā no 0,05 mol/L līdz 0,09 mol/L. Izvēloties koncentrāciju, tiek veikta iepriekšēja noteikšana. Piemēram, ja membrānas sloksnes garums starp elektrodiem elektroforēzes kamerā ir 8–10 cm, uz vienu membrānas garuma centimetru ir nepieciešams 25 V spriegums, un strāvas intensitātei jābūt 0,4–0,5 mA uz membrānas platuma centimetru. Ja elektroforēzes laikā šīs vērtības netiek sasniegtas vai pārsniegtas, bufera koncentrācija jāpalielina vai jāatšķaida.
Pārāk zema bufera koncentrācija izraisīs ātru joslu kustību un joslu platuma palielināšanos. No otras puses, pārmērīgi augsta bufera koncentrācija palēninās joslu migrāciju, apgrūtinot atsevišķu atdalīšanas joslu nošķiršanu.
Jāņem vērā, ka celulozes acetāta membrānas elektroforēzē ievērojama daļa strāvas tiek vadīta caur paraugu, kas rada ievērojamu siltuma daudzumu. Dažreiz izvēlēto bufera koncentrāciju var uzskatīt par atbilstošu. Tomēr paaugstinātas vides temperatūras apstākļos vai izmantojot augstāku spriegumu, ūdens iztvaikošana karstuma dēļ var pastiprināties, kā rezultātā var rasties pārmērīgi augsta bufera koncentrācija un pat izraisīt membrānas izžūšanu.
Parauga apjoms
Celulozes acetāta membrānas elektroforēzē parauga tilpumu nosaka dažādi faktori, tostarp elektroforēzes apstākļi, paša parauga īpašības, krāsošanas metodes un noteikšanas metodes. Parasti, jo jutīgāka ir noteikšanas metode, jo mazāks var būt parauga tilpums, kas ir izdevīgi atdalīšanai. Ja parauga tilpums ir pārmērīgs, elektroforētiskās atdalīšanas shēmas var nebūt skaidras, un krāsošana var būt arī laikietilpīga. Tomēr, kvantitatīvi analizējot atdalītās iekrāsotās joslas, izmantojot eluēšanas kolorimetriskās noteikšanas metodes, parauga tilpumam nevajadzētu būt pārāk mazam, jo tas var izraisīt zemākas absorbcijas vērtības atsevišķiem komponentiem, kā rezultātā var rasties lielākas kļūdas to satura aprēķināšanā. Šādos gadījumos parauga tilpums ir atbilstoši jāpalielina.
Parasti parauga tilpums, kas pievienots katram parauga uzlikšanas līnijas centimetram, ir robežās no 0,1 līdz 5 μL, kas atbilst parauga daudzumam no 5 līdz 1000 μg. Piemēram, ikdienas seruma proteīna elektroforēzes analīzē parauga tilpums, kas pievienots katrā lietošanas līnijas centimetrā, parasti nepārsniedz 1 μL, kas atbilst 60 līdz 80 μg proteīna. Tomēr, analizējot lipoproteīnus vai glikoproteīnus, izmantojot to pašu elektroforēzes metodi, parauga tilpums ir attiecīgi jāpalielina.
Visbeidzot, vispiemērotākais parauga tilpums ir jāizvēlas, pamatojoties uz īpašiem apstākļiem, veicot vairākus iepriekšējus eksperimentus.
Krāsošanas šķīduma izvēle
Celulozes acetāta membrānas elektroforēzes atdalītās joslas pirms noteikšanas parasti tiek iekrāsotas. Dažādām paraugu sastāvdaļām ir nepieciešamas dažādas krāsošanas metodes, un krāsošanas metodes, kas piemērotas celulozes acetāta membrānas elektroforēzei, var nebūt pilnībā piemērojamas filtrpapīram.
Ir trīs galvenie principi, pēc kuriem izvēlēties krāsošanas risinājumucelulozes acetāta membrāna. Pirmkārt,Priekšroka jādod ūdenī šķīstošām krāsvielām, nevis spirtā šķīstošām krāsvielām, lai izvairītos no membrānas saraušanās un deformācijas, ko izraisa pēdējo krāsošanas šķīdums. Pēc krāsošanas ir svarīgi noskalot membrānu ar ūdeni un samazināt krāsošanas ilgumu. Pretējā gadījumā membrāna var salocīties vai sarauties, kas ietekmētu turpmāko noteikšanu.
Otrkārt, paraugam ir vēlams izvēlēties krāsvielas ar spēcīgu krāsojuma afinitāti. Seruma proteīnu celulozes acetāta membrānas elektroforēzē aminomelno 10B parasti izmanto, jo tai ir spēcīga krāsošanas afinitāte pret dažādiem seruma proteīna komponentiem un tā stabilitāte.
Treškārt, jāizvēlas uzticamas kvalitātes krāsvielas. Dažas krāsvielas, neskatoties uz to pašu nosaukumu, var saturēt piemaisījumus, kas pēc krāsošanas rada īpaši tumšu fonu. Tas var pat aizmiglot sākotnēji labi atdalītās joslas, padarot tās grūti atšķiramas.
Visbeidzot, svarīga ir krāsošanas šķīduma koncentrācijas izvēle. Teorētiski varētu šķist, ka lielāka krāsošanas šķīduma koncentrācija nodrošinātu rūpīgāku parauga komponentu iekrāsošanu un labākus krāsošanas rezultātus. Tomēr tas tā nav. Saistīšanās afinitātei starp parauga komponentiem un krāsvielu ir noteikta robeža, kas nepalielinās, palielinoties krāsošanas šķīduma koncentrācijai. Gluži pretēji, pārmērīgi augsta krāsošanas šķīduma koncentrācija ne tikai izšķiež krāsvielu, bet arī apgrūtina skaidra fona sasniegšanu. Turklāt, kad krāsas intensitāte sasniedz noteiktu maksimālo vērtību, krāsvielas absorbcijas līknei nav lineāras attiecības, it īpaši kvantitatīvos mērījumos. Celulozes acetāta membrānas elektroforēzē krāsošanas šķīduma koncentrācija parasti ir zemāka nekā papīra elektroforēzē izmantotā.
Sīkāka informācija par Pekinas Liuyi biotehnoloģiju's celulozes acetāta membrānaelektroforēzes tvertni un tās elektroforēzes lietojumprogrammu, lūdzu, apmeklējiet šeit:
lEksperiments seruma olbaltumvielu atdalīšanai ar celulozes acetāta membrānu
lCelulozes acetāta membrānas elektroforēze
lLietojot celulozes acetāta membrānas elektroforēzi, jāpatur prātā vairāki apsvērumi (1)
Ja jums ir kāds mūsu produktu iegādes plāns, lūdzu, nevilcinieties sazināties ar mums. Jūs varat nosūtīt mums ziņojumu uz e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu], vai, lūdzu, zvaniet mums pa tālruni +86 15810650221 vai pievienojiet Whatsapp +86 15810650221, vai Wechat: 15810650221.
Atsauce:Elektroforēze (otrais izdevums), autors Li kungs
Izlikšanas laiks: jūnijs 06-2023