Ievads
Gēla elektroforēze ir fundamentāls paņēmiens molekulārajā bioloģijā, ko plaši izmanto proteīnu, nukleīnskābju un citu makromolekulu atdalīšanai. Pareiza parauga tilpuma, sprieguma un elektroforēzes laika kontrole ir ļoti svarīga, lai iegūtu precīzus un reproducējamus rezultātus.Mūsu laboratorijas kolēģis piedāvālabāko praksi šo parametru pārvaldīšanai SDS-PAGE gēla elektroforēzes laikā.
Beijing Liuyi Biotechnology gēla elektroforēzes produkti
Parauga apjoms: konsekvences nodrošināšana
Veicot SDS-PAGE elektroforēzi, parauga tilpums ir galvenais faktors, kas var būtiski ietekmēt jūsu rezultātu izšķirtspēju. Parasti ir ieteicams iepildīt 10 µL kopējā proteīna katrā iedobē. Lai nodrošinātu konsekvenci un novērstu paraugu difūziju starp blakus esošajām iedobēm, ir svarīgi ievietot vienādu tilpumu 1x iekraušanas buferšķīduma jebkurā tukšā iedobē. Šis piesardzības pasākums palīdz novērst paraugu izplatīšanos blakus joslās, kas var notikt, ja aka tiek atstāta tukša.
Pirms paraugu ievietošanas vienmēr sāciet ar molekulmasas marķiera pievienošanu vienai iedobei. Tas ļauj viegli noteikt olbaltumvielu izmērus pēc elektroforēzes.
Sprieguma kontrole: balansēšanas ātrums un izšķirtspēja
Elektroforēzes laikā pielietotais spriegums tieši ietekmē gan ātrumu, ar kādu paraugi migrē cauri želejai, gan atdalīšanas izšķirtspēju. SDS-PAGE ieteicams sākt ar zemu spriegumu aptuveni 80 V. Šis sākotnējais zemais spriegums ļauj paraugiem lēni un vienmērīgi migrēt, koncentrējot tos asā joslā, kad tie nonāk atdalīšanas gēlā.
Kad paraugi ir pilnībā iekļuvuši atdalīšanas gēlā, spriegumu var palielināt līdz 120 V. Šis augstāks spriegums paātrina migrāciju, nodrošinot, ka olbaltumvielas tiek efektīvi atdalītas atbilstoši to molekulmasai. Ir svarīgi uzraudzīt bromfenola zilās krāsvielas frontes progresu, kas norāda uz elektroforēzes pabeigšanu. Želejām ar koncentrāciju 10-12%, parasti pietiek ar 80-90 minūtēm; tomēr 15% gēliem var būt nepieciešams nedaudz pagarināt darbības laiku.
Laika pārvaldība: zinot, kad apstāties
Laiks ir vēl viens būtisks faktors gēla elektroforēzē. Ja gēls tiek darbināts pārāk ilgi vai pārāk īsu laiku, tas var izraisīt neoptimālu atdalīšanu. Bromfenolzilās krāsvielas migrācija ir noderīgs rādītājs: kad tā sasniedz gela dibenu, parasti ir laiks pārtraukt iesūkšanos. Standarta gēliem, piemēram, 10–12%, elektroforēzes ilgums parasti ir aptuveni 80–90 minūtes. Lielākiem gēliem, piemēram, 15%, darbības laiks ir jāpagarina, lai nodrošinātu pilnīgu olbaltumvielu atdalīšanu.
Buferu pārvaldība: buferu atkārtota izmantošana un sagatavošana
Elektroforēzes buferi var atkārtoti izmantot 1-2 reizes atkarībā no jūsu laboratorijas īpašajiem apstākļiem. Tomēr, lai iegūtu optimālus rezultātus, ir ieteicams sagatavot svaigu 10x buferšķīdumu un atšķaidīt to tieši pirms lietošanas. Tas nodrošina, ka buferis saglabā savu efektivitāti, tādējādi nodrošinot ticamākus elektroforēzes rezultātus.
Beijing Liuyi Biotechnology gēla elektroforēzes produkti
Rūpīgi kontrolējot parauga tilpumu, spriegumu un elektroforēzes laiku, varat ievērojami uzlabot gēla elektroforēzes rezultātu precizitāti un reproducējamību. Šīs paraugprakses ieviešana laboratorijas darbā palīdzēs sasniegt skaidrākas un skaidrākas joslas, tādējādi nodrošinot labākus datus pakārtotajai analīzei.
Ja jums ir vairāk labu metožu, lai optimizētu gēla elektroforēzes eksperimentu, laipni lūdzam apspriest ar mums!
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) ir specializējies elektroforēzes instrumentu ražošanā vairāk nekā 50 gadus ar mūsu pašu profesionālo tehnisko komandu un pētniecības un attīstības centru. Mums ir uzticama un pilnīga ražošanas līnija no projektēšanas līdz pārbaudei un noliktava, kā arī mārketinga atbalsts. Mūsu galvenie produkti ir elektroforēzes šūna (tvertne/kamera), elektroforēzes barošanas avots, zils gaismas diodes caurgaismotājs, UV transiluminators, gēla attēlu un analīzes sistēma utt. Mēs piegādājam arī laboratorijas instrumentus, piemēram, PCR instrumentu, virpuļmaisītāju un centrifūgu laboratorijai.
Ja jums ir kāds mūsu produktu iegādes plāns, lūdzu, nevilcinieties sazināties ar mums. Jūs varat nosūtīt mums ziņojumu uz e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu], vai, lūdzu, zvaniet mums pa tālruni +86 15810650221 vai pievienojiet Whatsapp +86 15810650221, vai Wechat: 15810650221.
Lūdzu, skenējiet QR kodu, lai pievienotu vietnei Whatsapp vai WeChat.
Izlikšanas laiks: 20. augusts 2024