Princips
Celulozes acetāta plēves elektroforēze ir elektroforēzes metode, kurā kā balstu izmanto celulozes acetāta plēvi. Parādību, kurā uzlādētas daļiņas elektriskā lauka iedarbībā virzās uz pretējo elektrodu, sauc par elektroforēzi. Tā kā katram proteīnam ir noteikts izoelektriskais punkts, ja proteīnu ievieto šķīdumā, kura pH ir zemāks par tā izoelektrisko punktu, proteīns būs pozitīvi uzlādēts un virzīsies uz negatīvo elektrodu. Gluži pretēji, tas virzās uz pozitīvo polu. Tā kā olbaltumvielu molekulu kustības ātrums elektriskajā laukā ir saistīts ar to lādiņu, molekulu formu un izmēru, dažādas olbaltumvielas var atdalīt ar elektroforēzi. Serums satur dažādus proteīnus, kuriem visiem ir izoelektriskie punkti pie pH 7,5 vai mazāk. Kad serumu ievieto buferšķīdumā ar pH 8,6, lai veiktu elektroforēzi, visi seruma proteīni ir negatīvi uzlādēti un elektriskajā laukā virzīsies uz pozitīvo pusi. Tā kā dažādiem seruma proteīniem pie viena pH ir dažādi lādiņi, molekulārās daļiņas ir dažāda izmēra, līdz ar to migrācijas ātrums ir atšķirīgs, un tās tiek atdalītas ar elektroforēzi. Seruma proteīnu izoelektriskie punkti un molekulmasa ir parādīti tabulā zemāk:
| Olbaltumvielas | Izoelektriskie punkti (PI) | Molekulmasa |
| Albumīns | 4.88 | 69 000 |
| α1-gluulīns | 5.00 | 200 000 |
| α2-gluulīns | 5.06 | 300 000 |
| β-gluulīns | 5.12 | 9 000–150 000 |
| γ-gluulīns | 6,85 ~ 7,50 | 156 000–300 000 |
Eksperimenta mērķis ir atdalīt dažādus proteīnus asins serumā ar celulozes acetāta membrānu (saīsināti CAM) kā atbalsta barotni. CAM ir sava veida putuplastseplēve ar labu viendabīgumu un biezumu 0,1–1,5 mm, kurai ir noteikta ūdens absorbcija.
Materiāli, instrumenti un reaģenti CAM elektroforēzei
Paraugi:veselīga cilvēka asins serums
Instruments:barošanas avots DYY-6C, elektroforēzes tvertne DYCP-38C, izcila parauga ielāde WD-9404
Reaģenti
1) celulozes acetāta membrāna 7X9cm
2) PH 8,6 barbīta buferšķīdums (jonu stiprums 0,05–0,09, tas ir 0,06 tid laiks): ņem 1,84 g dietilbarbitūrskābes un pēc tam ņem 1,03 g dietilnātrija pentobarbitāla, pievieno nedaudz destilēta ūdens, lai karsētu, lai izšķīst, un pagatavo līdz 1000 ml;
3) Traipu: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, pievieno 100ml destilēta ūdens;
4) TBS/T vai PBS/T: 45 ml 95% etanola, 5 ml ledus etiķskābes, pievieno 50 ml destilēta ūdens;
5) Tīrīšanas šķīdums: 70 ml bezūdens etanola, 30 ml ledus etiķskābes.
Eksperimenta metoded
1) Sagatavojiet membrānu: iegremdējiet membrānu barbīta buferšķīdumā uz 30 min-8 h, izņemiet to, noņemiet papildu šķīdumu ar absorbējošu papīru.
2) Paraugu ielādēšana: Atšķiriet membrānas raupjo pusi un gludo pusi un atzīmējiet līniju 1,5 cm attālumā līdz augšējam galam nelīdzenajā pusē. Ievietojiet paraugus, izmantojot izcilu paraugu ielādes rīku nelīdzenajā pusē. Piezīme: paraugi jāievieto membrānas raupjā pusē. Kad seruma paraugi ir pilnībā iekļuvuši membrānā, apgrieziet membrānu, novietojiet raupjo pusi (ar paraugiem) ar priekšpusi uz leju tvertnei, un galu ar paraugiem novieto negatīvajā elektrodā.
3) Elektroforēze: ieslēdziet strāvas padevi, 0.4～0,6 m A/cm membrāna, darbības laiks ir 30-45 min. Pēc elektroforēzes izslēdziet strāvu.
4) Notraipīt un notīrīt: izņemiet membrānu no tvertnes un iegremdējietit 5 minūtes krāsvielu šķīdumā un pēc tam 3-4 reizes atkal un atkal tīriet to tīrīšanas šķīdumā, līdz fona krāsa ir skaidra. Seruma olbaltumvielas ir jāparāda uz joslām, un parasti ir piecas zonas, kas veido augšējo galu līdz iezīmētajai līnijai, albumīns, α1-gluulīns, α2-gluulīns, β-gluulīns, γ-gluulīns.
5) Konservēšana: ielieciet sauso elektroforēzijoslatīrīšanas šķīdumā 10-15 minūtes, pēc tam izņemiet to un uzlīmējiet uz tīra stikla, pēc tam, kad tas nožūst, tas kļūs par caurspīdīgu plēvijosla.
EksperimentējietRezultāts
Seruma paraugu atdalīšanas efekts ir labs, un nav joslas astes parādības. Rezultātu atkārtojamība atšķiras atkarībā no testa procedūrām un eksperimentētāja metodēm, un atkārtojamība ir augsta.
Secinājums
Ātrās klīniskās elektroforēzes noteikšanas sistēma (Elektroforēzes tvertneDYCP-38C,barošanas avotsDYY-6C un izcila paraugu ielāde WD-9404), ko ražo mūsuuzņēmums Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdatbilst eksperimentālajām prasībām,unrezultāti ir reproducējami, vienkārši un ātri, piemērotimācīšanapētījumiem.
Pekina LiuyiBiotechnology Co., Ltd specializējas elektroforēzes produktu ražošanā dzīvības zinātnes nozarei, kasĶīnā ir vairāk nekā 50 gadu vēsture, un uzņēmums var nodrošināt stabilus un augstas kvalitātes produktus visā pasaulē. Gadu attīstības gaitā tas ir jūsu izvēles cienīgs!
Tagad mēs meklējam partnerus, tiek gaidīti gan OEM elektroforēzes tvertnes, gan izplatītāji.
Lai iegūtu vairāk informācijas par mums, lūdzu, sazinieties ar mums pa e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu].
Publicēšanas laiks: 14. novembris 2022