Komētas tests: jutīgs paņēmiens DNS bojājumu noteikšanai un labošanai

Comet Assay (vienšūnas gēla elektroforēze, SCGE) ir jutīga un ātra metode, ko galvenokārt izmanto DNS bojājumu noteikšanai un labošanai atsevišķās šūnās. Nosaukums “Comet Assay” cēlies no raksturīgās komētas formas, kas parādās rezultātos: šūnas kodols veido “galvu”, savukārt bojātie DNS fragmenti migrē, veidojot komētu atgādinošu “asti”.

Princips

Comet Assay princips ir balstīts uz DNS fragmentu migrāciju elektriskajā laukā. Neskarta DNS paliek šūnas kodolā, savukārt bojāta vai sadrumstalota DNS migrē uz anodu, veidojot komētas “asti”. Astes garums un intensitāte ir tieši proporcionāla DNS bojājuma pakāpei.

Procedūra

1. Šūnu sagatavošana: Pārbaudāmās šūnas sajauc ar agarozi ar zemu kušanas temperatūru un izklāj uz mikroskopa priekšmetstikliņiem, veidojot viendabīgu slāni.
2. Šūnu līze: Priekšmetstikliņus iegremdē līzes šķīdumā, lai noņemtu šūnu membrānu un kodola membrānu, pakļaujot DNS.
3. Elektroforēze: Priekšmetstikliņus ievieto elektroforēzes kamerā sārmainos vai neitrālos apstākļos. Bojāti DNS fragmenti elektriskā lauka ietekmē migrē uz pozitīvo elektrodu.
4. Krāsošana: Pēc elektroforēzes priekšmetstikliņus iekrāso ar fluorescējošu krāsvielu (piemēram, etīdija bromīdu), lai vizualizētu DNS.
5. Mikroskopiskā analīze: Izmantojot fluorescences mikroskopu vai specializētu programmatūru, tiek analizētas komētas formas un izmērīti tādi parametri kā astes garums un intensitāte.

Attēls no biorenderēšanas

Datu analīze

Comet Assay rezultāti tiek novērtēti, pamatojoties uz vairākiem galvenajiem parametriem:

• Astes garums: atspoguļo attālumu, kādā DNS migrē, norādot DNS bojājuma apmēru.
• Astes DNS saturs: DNS procentuālais daudzums, kas migrē astē, ko bieži izmanto kā DNS bojājumu kvantitatīvu mērījumu.
• Olive Tail Moment (OTM): Apvieno gan astes garumu, gan astes DNS saturu, lai nodrošinātu visaptverošāku DNS bojājumu mērījumu.

Lietojumprogrammas

1. Genotoksicitātes pētījumi: Comet Assay tiek plaši izmantots, lai novērtētu ķīmisko vielu, zāļu un starojuma ietekmi uz šūnu DNS, padarot to par galveno rīku genotoksicitātes pārbaudēm.
2. Vides toksikoloģija: palīdz analizēt vides piesārņotāju ietekmi uz organismu DNS, sniedzot ieskatu ekosistēmu drošībā.
3. Medicīniskie un klīniskie pētījumi: Comet Assay izmanto DNS labošanas mehānismu, vēža un citu ar DNS saistītu slimību pētīšanai. Tas arī novērtē vēža terapijas, piemēram, staru terapijas un ķīmijterapijas, ietekmi uz DNS.
4. Pārtikas un lauksaimniecības zinātnes: izmanto, lai novērtētu pesticīdu, pārtikas piedevu un citu vielu drošību un pētītu to toksisko ietekmi dzīvnieku modeļos.

Priekšrocības

• Augsta jutība: spēj noteikt zemu DNS bojājumu līmeni.
• Vienkārša darbība: Paņēmiens ir vienkāršs, tāpēc tas ir piemērots augstas caurlaidības skrīningam.
• Plašs pielietojums: To var pielietot dažādiem šūnu tipiem, tostarp dzīvnieku un augu šūnām.
• Kvantitatīvās noteikšanas problēmas: Sniedzot kvalitatīvus datus par DNS bojājumiem, kvantitatīvā analīze lielā mērā ir atkarīga no programmatūras un attēlu analīzes metodēm.
• Eksperimentālie apstākļi: Rezultātus var ietekmēt tādi faktori kā elektroforēzes laiks un pH, tādēļ ir nepieciešama rūpīga eksperimentālo apstākļu kontrole.

Ierobežojumi

Comet Assay ir nenovērtējams instruments biomedicīnas pētījumos, vides zinātnē un zāļu izstrādē, pateicoties tā elastībai un augstajai jutībai DNS bojājumu noteikšanā un labošanā. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)piedāvā horizontālu elektroforēzes kameru komētas pārbaudei. Laipni lūdzam sazināties ar mums, lai apspriestu parKomētas pārbaudeprotokols.

Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) ir specializējies elektroforēzes instrumentu ražošanā vairāk nekā 50 gadus ar mūsu pašu profesionālo tehnisko komandu un pētniecības un attīstības centru. Mums ir uzticama un pilnīga ražošanas līnija no projektēšanas līdz pārbaudei un noliktava, kā arī mārketinga atbalsts. Mūsu galvenie produkti ir elektroforēzes šūna (tvertne/kamera), elektroforēzes barošanas avots, zils gaismas diodes caurgaismotājs, UV transiluminators, gēla attēlu un analīzes sistēma utt. Mēs piegādājam arī laboratorijas instrumentus, piemēram, PCR instrumentu, virpuļmaisītāju un centrifūgu laboratorijai.

Ja jums ir kāds mūsu produktu iegādes plāns, lūdzu, nevilcinieties sazināties ar mums. Jūs varat nosūtīt mums ziņojumu uz e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu], vai, lūdzu, zvaniet mums pa tālruni +86 15810650221 vai pievienojiet Whatsapp +86 15810650221, vai Wechat: 15810650221.

Lūdzu, skenējiet QR kodu, lai pievienotu vietnei Whatsapp vai WeChat.