Parauga sagatavošana unNotiek ielāde
Tā kā vairumā gadījumu tiek izmantota nepārtraukta bufersistēma bez želejas, paraugiem jābūt atbilstošai koncentrācijai un nelielam tilpumam. Izmantojiet apipetelai lēnām pievienotu paraugu ar 5–10 μg katrā iedobē, lai izvairītos no ievērojamas izšķirtspējas samazināšanās. Kadiekraušanas paraugs, strāvas padevei jābūt izslēgtai. Paraugam jāsatur indikatorkrāsviela (0,025% bromfenolzilā vai oranžā krāsā) un saharoze (10-15%) vai glicerīns (5-10%), lai palielinātu tā blīvumu, koncentrētu paraugu un novērstu difūziju. Tomēr dažreiz saharoze vai glicerīns var radīt U-veida joslas elektroforēzes rezultātos, ko var novērst, izmantojot 2,5% Ficoll (polivinilpirolidonu).
Elektroforēze
Elektroforēzes spriegums ir 5-15 V/cm, parasti ap 10 V/cm. Lielu molekulu atdalīšanai spriegumam jābūt zemākam, parasti nepārsniedzot 5 V/cm.
Krāsošana
Krāsošanai parasti izmanto fluorescējošu krāsvielu etīdija bromīdu (EB), lai novērotu DNS joslas agarozes gēlā. EB var ievietoties starp DNS molekulu bāzes pāriem, izraisot EB saistīšanos ar DNS. 260 nm ultravioletās gaismas absorbcija ar DNS tiek pārnesta uz EB, un saistītais EB izstaro fluorescenci pie 590 nm redzamās gaismas spektra sarkanoranžajā reģionā. Gēla krāsošana 1 mmol/L MgSO4 šķīdumā 1 stundu var samazināt fona fluorescenci, ko izraisa nesaistīts EB, atvieglojot neliela DNS daudzuma noteikšanu.
EB krāsvielai ir vairākas priekšrocības: tā ir viegli lietojama, nesalauž nukleīnskābes, tai ir augsta jutība, tā var iekrāsot gan DNS, gan RNS. EB var pievienot paraugam un izsekot, izmantojot UV absorbciju jebkurā laikā. Pēc krāsošanas EB var noņemt, ekstrahējot ar n-butanolu.
Tomēr EB krāsviela ir spēcīgs mutagēns, un apstrādes laikā ir jāievēro piesardzības pasākumi, piemēram, jāvalkā polietilēna cimdi. Akridīna apelsīns ir arī plaši izmantota krāsviela, jo tā var atšķirt vienpavedienu un divpavedienu nukleīnskābes (DNS, RNS). Tam ir zaļa fluorescence (530 nm) divpavedienu nukleīnskābēm un sarkana fluorescence (640 nm) vienpavedienu nukleīnskābēm. Turklāt krāsošanai var izmantot citas krāsvielas, piemēram, metilēnzilo, metilēnzaļo un hinolīnu B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) ir specializējies elektroforēzes instrumentu ražošanā vairāk nekā 50 gadus ar mūsu pašu profesionālo tehnisko komandu un pētniecības un attīstības centru. Mums ir uzticama un pilnīga ražošanas līnija no projektēšanas līdz pārbaudei un noliktava, kā arī mārketinga atbalsts. Mūsu galvenie produkti ir elektroforēzes šūna (tvertne/kamera), elektroforēzes barošanas avots, zils LED caurgaismotājs, UV transiluminators, gēla attēla un analīzes sistēma utt.
Tagad mēs meklējam partnerus, tiek gaidīti gan OEM elektroforēzes tvertnes, gan izplatītāji.
Ja jums ir kāds mūsu produktu iegādes plāns, lūdzu, nevilcinieties sazināties ar mums. Jūs varat nosūtīt mums ziņojumu uz e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu], vai, lūdzu, zvaniet mums pa tālruni +86 15810650221 vai pievienojiet Whatsapp +86 15810650221, vai Wechat: 15810650221.
Lūdzu, skenējiet QR kodu, lai pievienotu vietnei Whatsapp vai WeChat.
Izlikšanas laiks: 20. decembris 2023