1. Klasifikācija
Gēla elektroforēzi iedala vertikālos veidos (ieskaitot kolonnu želejas un plākšņu želejas) un horizontālos (galvenokārt plākšņu želejas) (6.-18. attēls). Parasti vertikālā atdalīšana ir nedaudz pārāka par horizontālo, bet horizontālajai gēla sagatavošanai ir vismaz četras priekšrocības: zem visa gēla ir atbalsts, kas ļauj izmantot zemas koncentrācijas agarozi; iespējams sagatavot dažādas specifikācijas agarozes gēla plāksnes; gēla sagatavošana un parauga iekraušana ir ērtāka; elektroforēzes kamera ir viegli uzbūvējama un rentabla. Tā kā horizontālo elektroforēzi veic, ja agarozes gēla plāksne ir pilnībā iegremdēta aptuveni 1 mm zem elektroforēzes bufera virsmas, to sauc arī par iegremdēto elektroforēzi.
Elektroforēzes tvertne DYCP-31DN agarozes gēla elektroforēzei
2. Bufersistēma
Nukleīnskābju atdalīšanā lielākā daļa sistēmu izmanto nepārtrauktas sistēmas. Parasti izmantotie elektroforēzes buferi ietver TBE (0,08 mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/L borskābe, 0,0024 mol/L EDTA) un THE (0,04 mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/L). nātrija acetāts, 0,0018 mol/L EDTA) buferšķīdums. Šos buferšķīdumus parasti sagatavo kā 10x izejas šķīdumus un lietošanas laikā atšķaida līdz vajadzīgajai koncentrācijai. Lineārās un cirkulārās DNS migrācijas ātrums agarozes gēlā atšķiras atkarībā no izmantotā bufera. THE buferšķīdumā lineārās DNS migrācijas ātrums ir lielāks nekā apļveida DNS, savukārt TBE buferī ir pretējs.
3.Agarozes želejas sagatavošana
(1) Horizontālās agarozes želejas sagatavošana
(a) Sagatavojiet vajadzīgo agarozes gela koncentrāciju, izmantojot 1x elektroforēzes buferšķīdumu.
b) Sildiet agarozi līdz pilnīgai izšķīdināšanai verdoša ūdens vannā, uz magnētiskā maisītāja vai mikroviļņu krāsnī. Atdzesē agarozes šķīdumu līdz 55°C un pievieno etīdija bromīda (EB) krāsvielu līdz galīgajai koncentrācijai 0,5 μg/ml.
(c) Noslēdziet stikla vai akrila plākšņu malas ar nelielu daudzumu agarozes želejas, pievienojiet ķemmi un novietojiet ķemmes zobus apmēram 0,5–1,0 mm virs plāksnes.
d) Nepārtraukti ielejiet izkausēto agarozes gēla šķīdumu stikla vai akrila plāksnes veidnē (biezums ir atkarīgs no DNS parauga tilpuma), izvairoties no gaisa burbuļu iekļūšanas. Ļaujiet tai dabiski sacietēt istabas temperatūrā.
(e) Pēc pilnīgas sacietēšanas uzmanīgi noņemiet ķemmi. Pievienojiet gēla tvertnei atbilstošu elektroforēzes buferšķīduma daudzumu, nodrošinot, ka gēla plāksne ir iegremdēta apmēram 1 mm zem elektroforēzes bufera virsmas.
(2) Vertikālās agarozes želejas sagatavošana
a) No stikla plāksnēm noņemiet taukus vai atlikumus, mazgājot tos ar etanolu.
(b) Novietojiet starplikas starp priekšējiem un aizmugurējiem aizsprostiem, izlīdziniet starpliku plākšņu malas ar priekšējo un aizmugurējo aizsprostu un nostipriniet tās ar skavām.
(c) Pievienojiet 2% agarozes 1x buferšķīdumā starp starplikas plākšņu malām, lai izveidotu 1 cm augstu agarozes aizbāzni gēla liešanas kameras apakšā.
(d) Ielejiet izkusušo agarozes želeju vēlamajā koncentrācijā, kas sagatavota 1x buferšķīdumā, gēla kamerā līdz 1 cm zem augšdaļas.
(e) Ievietojiet ķemmi, izvairoties no gaisa burbuļu iesprūšanas zem ķemmes zobiem. Dažreiz agarozes želejas dzesēšanas laikā pie ķemmes zobiem var parādīties grumbas; šādos gadījumos vienkārši pievienojiet nedaudz kausētas agarozes augšpusē, lai tā sacietētu.
(f) Noņemiet ķemmi. Lai novērstu bufera noplūdi ielādes spraugā, noblīvējiet savienojumu starp agarozes gēla plāksni un elektroforēzes kameru ar 2% agarozi un pievienojiet nepieciešamo buferšķīduma daudzumu.
(g) Pievienojiet 1x elektroforēzes buferšķīdumu gēla kamerai.
(h) Uzmanīgi ievietojiet DNS paraugus agarozes gēlā zem buferšķīduma.
Vairāk informācijas par pamatzināšanām par agarozes gēla elektroforēzi dalīsimies nākamnedēļ. Vēlaties, lai šī informācija būtu noderīga jūsu eksperimentā.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) ir specializējies elektroforēzes instrumentu ražošanā vairāk nekā 50 gadus ar mūsu pašu profesionālo tehnisko komandu un pētniecības un attīstības centru. Mums ir uzticama un pilnīga ražošanas līnija no projektēšanas līdz pārbaudei un noliktava, kā arī mārketinga atbalsts. Mūsu galvenie produkti ir elektroforēzes šūna (tvertne/kamera), elektroforēzes barošanas avots, zils LED caurgaismotājs, UV transiluminators, gēla attēla un analīzes sistēma utt.
Tagad mēs meklējam partnerus, tiek gaidīti gan OEM elektroforēzes tvertnes, gan izplatītāji.
Ja jums ir kāds mūsu produktu iegādes plāns, lūdzu, nevilcinieties sazināties ar mums. Jūs varat nosūtīt mums ziņojumu uz e-pastu[aizsargāts ar e-pastu]vai[aizsargāts ar e-pastu], vai, lūdzu, zvaniet mums pa tālruni +86 15810650221 vai pievienojiet Whatsapp +86 15810650221, vai Wechat: 15810650221.
Lūdzu, skenējiet QR kodu, lai pievienotu vietnei Whatsapp vai WeChat.
Izlikšanas laiks: Dec-07-2023